Monoklonale Antikörper

Monoklonale Antikörper können gegen eine Vielzahl von Antigenen (Proteine oder Peptide gekoppelt an Carrier-Protein) hergestellt werden.
Antipeptid-Projekte beinhalten die Peptidselektion (sofern gewünscht), die Peptidsynthese (ca. 25 mg, > 70 %) und die Konjugation an einen Carrier nach Wahl.
Bei Antiprotein-Projekten garantiert unser Hersteller mindestens einen positiven, spezifischen Klon gegen das verwendete Antigen.
Die Entwicklung der Hybridome erfolgt in 4 Phasen. Am Ende jeder Phase wird das Ergebnis mit dem Kunden besprochen, um die Vorgehensweise in der nächsten Phase abzustimmen.
Bei ausbleibendem Erfolg kann das Projekt nach jeder Phase beendet werden.

1. Immunisierung

• Präimmunserum von 4 Mäusen (6 – 8 Wochen alt)
• Antigeninjektionen über einen Immunisierungszeitraum von 4 Monaten
• Entwicklung einer Screening-Methode für den Antikörpernachweis
• ELISA-Titration der Seren
• Auswahl der Maus mit der besten Immunantwort für die Fusion
• Detaillierter Bericht über Immunisierungsprotokoll, Blutabnahmen und ELISA-Ergebnisse

2. Fusion und Screening

• Fusion von Mausmyelomzellen (Sp2/Oag-14 Zelllinie) mit den Milzzellen der ausgewählten Maus mit der besten Immunantwort
• Anzucht der Hybridoma in Zellkulturen
• Screening der Hybridoma auf positive Immunantwort
• Versand von je 1 ml Überstand aller positiv getesteten Hybridoma an den Kunden zur Überprüfung
• Vermehrung von 3 bis maximal 10 positiven Hybridoma und Lagerung in flüssigem Stickstoff

3. Cloning und Isotypisierung

• Klonierung der ausgewählten positiven Hybridoma (maximal 3) zur Gewinnung von stabilen, monoklonalen Klonen
• Screening der Kulturüberstände auf den gewünschten monoklonalen Antikörper
• Vermehrung und Reklonierung der positiven Klone
• Isotypisierung aller selektierten Klone

4. Lagerung der Zelllinien

• Vermehrung der selektierten Hybridome
• Einfrieren (- 170°C) von maximal 10 Stamm-Hybridom-Zelllinien, die spezifische polyklonale Antikörper gebildet haben (5 Vials pro Hybridom)
• Einfrieren (- 170°C) von maximal 3 Hybridomen, die spezifische monoklonale Antikörper gebildet haben (5 Vials pro Hybridom)
• alle Vials enthalten 3 – 5 x 10⁶ Zellen